一、 儀器介紹

實驗目的：

確定重複接觸受試物對哺乳動物是否可引起皮膚變態反應及其程度

試驗概述：  

部封閉塗（tú）皮試驗（Buehler test，BT）和豚鼠值試（shì）驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗動物通過多次皮膚塗抹（誘導（dǎo）接觸）或皮內注射受試物10d~14d（誘導階段）後,給予激發劑量的受試物,觀察實驗動物,並與對照動物比較對激發接觸受試物的皮膚反應強度。

小鼠（shǔ）部淋巴結分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部給予實驗（yàn）動物受試物,引起淋巴結（jié）的（de）淋巴細胞增（zēng）生,淋巴細胞增生與受試物劑量（過敏程度）成比例。利用（yòng）放射性標（biāo）記（jì）方法,測定試驗組與（yǔ）對照（zhào）組淋巴細胞的（de）標記率,並進（jìn）行對比,獲得刺激指數,評價致（zhì）敏強（qiáng）度。

應用範圍（wéi）

應用於科研、農業、衛生（shēng）、教（jiāo）育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農藥（yào）登記毒理學試驗方法第9部分皮膚變（biàn）態反應（致敏）試驗》

二、試驗步驟:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠（shǔ）

操作步驟:

誘導階段（duàn）:通過封閉式皮（pí）膚塗抹受試物，持續10-14天。激發階（jiē）段:間隔後再次塗抹受試物，觀察皮膚反應。

觀（guān）察指（zhǐ）標:紅斑、水腫等皮膚炎症反應的強度(主觀評（píng）分)

優點:

模擬（nǐ）人類皮膚接觸途徑（jìng），適（shì）用於部製劑(如化妝品、外用藥物)

無需注射，操作相對溫（wēn）和。0

缺點:

敏感性較低，可能漏檢弱致敏物，。依賴主（zhǔ）觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳統化妝品、外用藥品的安全性評估。

2.豚鼠值試驗（yàn）（GPMT）

動物模型:豚鼠

操作步驟:

誘（yòu）導階段:皮內注射（shè）受試物（常聯合弗氏完全佐劑）結合皮膚塗抹，持續10-14天。

激發（fā）階段:再次塗抹受試物，評估皮膚反應。

觀察指標:與BT類似，但（dàn）反應（yīng）更強烈(紅斑、水腫、硬結)

優點:

敏感性高，可檢測（cè）強致敏物和弱致（zhì）敏物;

國際的“金（jīn）標準（zhǔn）”，尤其適用於（yú）化學品和工業原料。

缺點:

使用佐劑可能引發過度免疫反應，導致（zhì）假陽性;

動物痛苦程度較高，倫理爭（zhēng）議較大。

應用場景:工（gōng）業化（huà）學品（pǐn）、強致敏性物質(如染發劑、橡膠（jiāo）添加劑)的（de）嚴格檢測（cè）。

3.小鼠部淋巴結試驗（LLNA）

動物模型:小鼠.

操作步驟:

誘導階段:連續3天耳部塗抹受（shòu）試物。

檢測指標:通（tōng）過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺激指數（SI）觀察指標:淋巴結淋巴細胞增殖（zhí）程（chéng）度（dù）（SI>3判（pàn）為陽（yáng）性）

優點:

客觀定量:減少主觀評分誤差；

符合3R原則:動物用量少，無需激發（fā）階段，痛苦小;

高效快速:試驗周期短(約1周)。

缺點:

對某些物質(如金屬鹽)敏感性不足，需使用（yòng）放射性物質或特殊（shū）設備（bèi），成（chéng）本較高。

應用場景:歐盟等法規優先推薦的替代方法，廣泛用於藥品、化妝（zhuāng）品（pǐn）及化工產品的初篩。