一、 儀器介（jiè）紹

實驗目的：

本試驗檢測受試（shì）物是否引起培養（yǎng）的哺乳動（dòng）物細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性

實驗概述：

在加入和不（bú）加入代謝活（huó）化係統的條件下,使培養的哺乳動物細胞暴露於受試物中。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙（xiān）素或秋水仙胺）處（chù）理,使細胞停止在中期（qī）分裂（liè）相（xiàng）,隨後收獲細胞,製片,染色,分析染色（sè）體畸（jī）變。

大部分的致突變劑導致染色單體型（xíng）畸變（biàn）,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍體（tǐ）的增加可能預示著有染色體數目畸變的可能,但本方法並不適合用於測定染（rǎn）色體的數目畸（jī）變。

應用（yòng）範圍

應用於科研、農業、衛生、教育、霧霾（mái）狀態可（kě）吸入顆（kē）粒染（rǎn）毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥（yào）登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色（sè）體

畸變試驗》

二、試驗流（liú）程

1）細胞培（péi）養

選擇合適細胞係，在含血（xuè）清（qīng）培（péi）養基中培養至對數生長期。

2）受試物處理

設置多個濃（nóng）度組（需包括細胞毒性評估，如50%生長抑製濃度）

陽性對照（如絲（sī）裂黴（méi）素C、環磷酰（xiān）胺等已知誘變（biàn）劑）

陰性對照（溶劑對照）

3.）代謝（xiè）活化係統（S9混合液）

模擬體內代謝，用（yòng）於檢測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大鼠（shǔ）肝S9）

4.）采樣（yàng）時間

短期（qī）處理:1個細胞周期（通常24小時，含或不含S9）

長（zhǎng）期處理:覆蓋多個細胞周期（qī）（如48小時）

5）染色（sè）體製備

秋（qiū）水仙素（sù）（或秋水仙胺）處理:阻斷（duàn）中期（qī）細胞。

低（dī）滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（dìng）（甲（jiǎ）醇:冰醋酸=3:1）後滴片，Giemsa染色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。

三、儀器與試劑

關鍵儀器：

培養箱（xiāng）、生物安（ān）全（quán）櫃、離心機、顯微鏡（jìng）（配備油鏡和圖像分析係統）

染色體自動掃描儀（yí）（可選）

主要試劑:

細胞培養基、胎牛血清（qīng）、胰蛋白酶。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混（hún）合液。